编者说 /
背景介绍
转染(transfection)是指真核细胞由于外源DNA掺入而获得新的遗传标志的过程。外源基因进入细胞主要有四种方法：电击法、磷酸钙法和脂质体介导法和病毒介导法。电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入；磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入细胞；病毒法是利用包装了外源基因的病毒感染细胞的方法使得其进入细胞。但是由于电击法和磷酸钙法的实验条件控制较严、难度较大；病毒法的前期准备较复杂、而且可能对于细胞有较大影响；所以现在对于很多常见细胞系，一般瞬时转染法多采用脂质体介导法。利用脂质体转染法最重要的就是防止其毒性，因此脂质体与质粒的比例、细胞密度以及转染的时间长短和培养基中血清的含量都是影响转染效率的重要问题，通过实验摸索出最佳转染条件对于转染效率的提升有很大的帮助。下面我们针对目前最常用的脂质体介导转染质粒或siRNA展开详细介绍。
转染步骤
1.细胞铺板
通常在转染前一天进行细胞铺板，根据细胞生长速度计数后进行铺板，保证第二天转染时细胞密度达到80%~90%左右。
2.细胞转染
以lip2000作为转染试剂为例，在转染前更换细胞培养基（无双抗，无血清），用opti-mem稀释质粒或siRNA，另用opti-mem稀释lip2000，将两者配好静置2~3分钟后，混匀在同一个管内，混匀时避免粗暴用力吹打（因为有可能会导致脂质体失效），静置3~5min，将配好的转染溶液加到细胞培养板中，并轻轻晃匀。
备注：细胞转染时为什么需要用无血清培养基呢？是因为血清的存在会影响DNA-转染复合物的形成，在DNA-转染复合物形成时需用无血清培养基opti-mem来稀释质粒或者siRNA和助转染试剂。另外血清的存在会降低转染效率，对于绝大部分贴壁细胞系来说，建议在做质粒或siRNA转染细胞前将完全培养基更换为无血清培养基。
3.换液
助转染试剂（如lipo2000）具有一定细胞毒性，所以需要在质粒或siRNA转染细胞4~8h后及时换液（将无血清培养基更换为完全培养基）。
4.检测
在成功转染24~48小时后，将细胞从培养箱中取出，可进行后续相关检测。
转染效率的验证
细胞转染效率的高低是该实验成败与否的关键。对于转染效率的验证，建议在安排转染实验时增加一组复孔，于相同实验体系下转染一组绿色荧光质粒作为对照，在质粒转染细胞24~48h后，通过荧光显微镜观测，可以大体判断整体实验是否转染成功（备注：目的质粒本身带荧光的，则不必再额外增加一组荧光转染观测组）。
注意事项
1. 在转染时尽量避免有双抗的存在，因为转染试剂会增加细胞膜的通透性，此时抗生素（如青霉素与链霉素）会进入细胞，增加细胞毒性，影响实验结果。
2. 质粒转染4-8小时要进行换液，因为lip2000存在细胞培养体系中时间过长会产生较大毒性，影响细胞状态。
3. 分别用无血清培养基稀释转染试剂与质粒或siRNA后，混合后一定要静置，以保证转染复合物的形成。
4. 转染试剂加入量的确定需要实验人员自己进行摸索确定，因为转染试剂的说明书加入量为大概范围，要想获得最佳转染效果须进行预实验确定。
5. 在转染siRNA前，因为RNA 以膜或干粉状态附着于管壁，开盖之前务必瞬时离心，使用前加 RNase Free Water 溶解成 20μM 的储存液，分装后置于-20℃~-80℃保存，以利于后续实验，且避免反复冻融（最多 5 次）。
结果展示
以上质粒转染细胞实验我们经过三次独立生物重复，可以看到实验不仅转染效率高，而且实验结果重复性也很好。
以上即为舍为斯生物为大家整理的关于质粒/siRNA转染细胞的详情介绍，希望能帮大家解决细胞转染中的相关问题。同时我们也会继续努力，为大家推出更多优质实用的文章~
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